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Q1: 為什么噬菌體在搖瓶階段沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)？
回復(fù)：在搖瓶階段，一般不會(huì)往搖瓶里面通氣。因此在搖瓶階段染噬菌體的幾率比較少。如果經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后，空氣中存在大量噬菌體，Z終也會(huì)導(dǎo)致?lián)u瓶培養(yǎng)發(fā)生污染，這時(shí)需要對(duì)搖床內(nèi)部做熏蒸等滅菌措施。
Q2: 大腸桿菌發(fā)酵過(guò)程中,出現(xiàn)一定的自溶情況,鏡檢有空泡現(xiàn)象。但是平板檢測(cè)，無(wú)噬菌斑出現(xiàn)。請(qǐng)問(wèn)這是什么原因造成的?
回復(fù)：自溶情況是在培養(yǎng)哪個(gè)階段發(fā)生呢？如果出現(xiàn)在培養(yǎng)中期就發(fā)生自溶，有可能感染噬菌體。涂平板檢查是否有噬菌斑，應(yīng)該盡量采用雙層平板，效果較好。此外，在產(chǎn)物產(chǎn)量及其他發(fā)酵參數(shù)都正常情況下，是不是因?yàn)閿嚢柁D(zhuǎn)速較高，到對(duì)數(shù)后期后會(huì)有一部分菌體發(fā)生自溶現(xiàn)象。
Q3: 如果是接種的超凈臺(tái)環(huán)境中有噬菌體,是不會(huì)進(jìn)入種子搖瓶啊?
回復(fù)：會(huì)的，接種時(shí)超凈工作臺(tái)風(fēng)是又上往下吹的，所以一般在超凈臺(tái)內(nèi)操作時(shí)，我們盡量減少瓶口敞開(kāi)的時(shí)間，而且盡量將搖瓶斜放，減少超凈臺(tái)內(nèi)的氣體進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。
Q4: 想知道處理芽孢染菌時(shí)為什么需要用堿水處理發(fā)酵罐呢?
回復(fù)：根據(jù)過(guò)去做過(guò)的實(shí)驗(yàn)，將分離出來(lái)的芽孢桿菌，分別在不同 pH 值培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在酸性的環(huán)境里，芽孢桿菌能生長(zhǎng)很好，而在堿性環(huán)境里卻無(wú)法生長(zhǎng); 此外，若罐體內(nèi)部存在一些結(jié)垢，經(jīng)過(guò)稀堿水處理后，結(jié)垢將變得松散，從而內(nèi)部芽孢桿菌也能夠釋放出來(lái)，便于滅菌殺死
Q5:甲醇如何滅菌?
回復(fù)：純的甲醇一般不需要除菌，本身應(yīng)該無(wú)菌。如果是甲醇溶液，那需要除菌，但不是放滅菌鍋內(nèi)滅菌，而是過(guò)濾除菌。裝甲醇的補(bǔ)料瓶需要放入滅菌鍋滅菌，若擔(dān)心滅菌效果不好，可加水滅菌。過(guò)濾除菌時(shí)一定慎選過(guò)濾器種類(lèi)，必須為抗有機(jī)溶劑，以避免過(guò)濾器在過(guò)濾過(guò)程中被甲醇腐蝕，一般采用PTFE，PP，PVDF，PES材質(zhì)都可以耐受甲醇。此外，甲醇過(guò)濾完也可以做無(wú)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。過(guò)程操作務(wù)必小心，一旦甲醇揮發(fā)會(huì)有毒性。
Q6:請(qǐng)問(wèn)芽孢桿菌消滅劑是什么？84消毒液可以嗎？
回復(fù)：當(dāng)時(shí)使用的芽孢桿菌殺菌劑為諾福殺菌劑，內(nèi)含過(guò)氧化氫、活性膠質(zhì)銀離子等等；84消毒液主要成分是次氯酸鈉，效果有限，因此沒(méi)有前者好用。
Q7: 補(bǔ)料瓶未連接前玻璃接頭接的是包扎的空氣過(guò)濾器嗎?
回復(fù)：補(bǔ)料瓶管線(xiàn)出來(lái)所連接的玻璃接頭為公頭，然后通過(guò)母頭和公頭連接兩邊管路。母頭的一端需加過(guò)濾器，若無(wú)過(guò)濾器，也可采用包扎的方式。除菌過(guò)濾器用錫箔紙包住，主要防止滅菌過(guò)程中有冷凝水浸濕過(guò)濾器，同時(shí)可以保證此處的滅菌溫度，棉花塞住不是太方便。
Q8:罐內(nèi)死角不容忽視，發(fā)酵罐聯(lián)軸器形式，哪種死角比較少，螺絲用厭氧高溫密封膠涂抹可以嗎?
回復(fù)：進(jìn)口發(fā)酵罐罐內(nèi)不會(huì)有死角，此概念在設(shè)計(jì)中已充分考慮。一般發(fā)酵罐采用直連驅(qū)動(dòng)馬達(dá)，而細(xì)胞罐采用磁力驅(qū)動(dòng)馬達(dá)。該兩種驅(qū)動(dòng)軸設(shè)計(jì)上不會(huì)有死角，謹(jǐn)記使用過(guò)程中不要隨意卸載或晃動(dòng)攪拌軸，導(dǎo)致密封圈密封性不佳即可。 您所提及的螺絲是罐蓋上面的嗎？在攪拌軸上的是可以涂抹，能否告訴我你要涂抹是的哪些螺絲？ 此外，密封膠質(zhì)量要有保證，不會(huì)在滅菌時(shí)進(jìn)入罐內(nèi)影響菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物純化
Q9:芽孢桿菌及大腸桿菌在外觀(guān)大小上區(qū)別為何?
回復(fù)：以枯草芽孢桿菌為例，大小一般為0.7～0.8×2～3微米，芽孢大小一般為0.6～0.9×1.0～1.5微米；大腸桿菌大小一般為0.4～ 0.7×1 ～3微米。
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